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弱堿性樹脂操作的基本步驟,蜜柚app下载直播分八步來講解

發布時間:2020-08-11瀏覽:421次
   弱堿性樹脂操作的基本步驟,蜜柚app下载最新网页分八步來講解
  1、樹脂的選擇
  當目的物具有較強的堿性或酸性時口腔診所廢水處理設備廠家,宜選用弱酸或弱堿性的樹脂,這樣有助於提高選擇性並便於洗脫。如目的物是弱酸性或弱堿性的小分子物質,往往選用強堿或強酸樹脂。對於大多數蛋白質、酶和其他生物大分子的分離多采用弱酸或弱堿性樹脂,以減少生物大分子的變性,有利於洗脫,並提高選擇性。
  2、層析柱
  離子交換層析要根據分離的樣品量選擇合適的層析柱,離子交換用的層析柱一般粗而短,不宜過長。直徑和柱長比一般為1:10~1:50之間,層析柱安裝要垂直。裝柱時要均勻平整,不能有氣泡。
  3、裝柱
  先把柱內裝滿起始緩衝液,用玻璃棒擠壓海綿,趕盡氣泡並把柱子垂直固定。將交換劑用起始緩衝液調稀攪勻後加入,柱內的交換劑應非常均勻地分布,不應出現節麵和氣泡,不能幹柱,床麵要平整,床高距柱頂2~3cm為宜。
  4、平衡緩衝液
  平衡緩衝液是指裝柱後及上樣後用於平衡離子交換柱的緩衝液。平衡緩衝液的離子強度和pH值的選擇首先要保證各個待分離物質如蛋白質的穩定。其次是要使各個待分離物質與離子交換劑有適當的結合,並盡量使待分離樣品和雜質與離子交換劑的結合有較大的差別。
  5、上樣
  離子交換層析的上樣時應注意樣品液的離子強度和pH值,上樣量也不宜過大,一般為柱床體積的1%-5%(體積分數)為宜,以使樣品能吸附在層析柱的上層,得到較好的分離效果。將柱中的緩衝液逐漸放出,使頂部液麵達到近於柱床麵時開始加樣。用注射器或細長的玻管沿柱壁繞環加入酶樣,待樣液達一定高度後再在柱中間小心加樣。
  6、洗脫緩衝液
  在離子交換層析中一般常用梯度洗脫,通常有改變離子強度和改變pH值兩種方式。改變離子強度通常是在洗脫過程中逐步增大離子強度,從而使與離子交換劑結合的各個組分被洗脫下來;而改變pH值的洗脫,對於陽離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫,陰離子交換劑一般是pH值從高到低。
  7、洗脫速度
  洗脫液的流速也會影響離子交換層析分離效果,洗脫速度通常要保持恒定。一般來說洗脫速度慢比快的分辨率要好,但洗脫速度過慢會造成分離時間長、樣品擴散、譜峰變寬、分辨率降低等副作用,所以要根據實際情況選擇合適的洗脫速度。
  8、樣品的濃縮、脫鹽
  離子交換層析得到的樣品往往鹽的質量分數較高,而且體積較大,樣品質量分數較低。所以一般離子交換層析得到的樣品要進行濃縮、脫鹽處理。另外在層析分離過程中還要注意操作手段和溶液環境,如溫度、壓力和緩衝係統對欲分離物質穩定性的影響,避免被分離物質失活。
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